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一、概況
Ames試驗(yàn)又稱鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體試驗(yàn)。本方法是利用鼠傷寒沙門菌的組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株發(fā)生回復(fù)突變的性能來檢測(cè)被檢物質(zhì)是否具有致突變性。
二、試驗(yàn)原理
AMES試驗(yàn)是一種利用微生物進(jìn)行突變的體外致突變實(shí)驗(yàn)法，利用一種利用突變型微生物菌株與被檢化學(xué)物質(zhì)接觸，如果該化學(xué)物質(zhì)具有致突變性，則可使突變性微生物發(fā)生回復(fù)突變，重新成為野生型微生物。
具有組氨酸缺陷型的沙門氏菌株，均含有控制His合成的基因，而培養(yǎng)基中不含組氨酸時(shí)，它們便不能生長(zhǎng)。然而，當(dāng)某些被檢物質(zhì)具有致突變性時(shí)，因這類物質(zhì)作用于細(xì)菌的DNA，使其特定部位發(fā)生基因突變而回復(fù)為有合成His能力的野生型菌株時(shí)，就又能在無組氨酸的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。常用的沙門氏菌株有TA98、TAl535、TA100和TA1588。每種菌株所檢測(cè)的誘變物的種類不同，每次試驗(yàn)可同時(shí)使用幾種菌株，只要其中有任何一株發(fā)生回變即屬陽性反應(yīng)結(jié)果。
考慮到許多物質(zhì)是在體內(nèi)經(jīng)代謝活化后才顯示出致突變性，艾姆斯等人采用了在體外加人哺乳動(dòng)物肝微粒體酶系統(tǒng)(簡(jiǎn)稱S-9混合液)使被檢物活化的方法，保證了試驗(yàn)結(jié)果更近似于哺乳動(dòng)物的代謝情況，同時(shí)可提高陽性檢出率。S-9混合液是在低溫?zé)o菌的條件下制備的，它是經(jīng)多氯聯(lián)苯或苯**誘導(dǎo)的雄性大白鼠**制成勻漿離心后的上清液。每次試驗(yàn)之前從液氮罐中取出上清液后，再加入輔酶和6-磷酸-葡萄糖，即為配制成的肝微粒體酶系統(tǒng)。但是，在檢測(cè)飲用水樣時(shí)，加入S-9混合液并不能提高其陽性檢出率，而要發(fā)致突變陰性報(bào)告時(shí)，則必須要做加入S-9混合液檢驗(yàn)各個(gè)項(xiàng)目均為陰性，并有重現(xiàn)性才能發(fā)陰性報(bào)告
三、步驟和方法
Ames試驗(yàn)的常規(guī)方法有斑點(diǎn)試驗(yàn)和平板摻入試驗(yàn)。菌株鑒定用于測(cè)試的菌株，需經(jīng)基因型和生物學(xué)性狀鑒定，符合要求才能投入使用。鑒定前先進(jìn)行增菌培養(yǎng)。為鑒定結(jié)果可靠，需同時(shí)培養(yǎng)野生型TV菌株，作為測(cè)試菌基因型之對(duì)照。